Revista de Ciencias Tecnológicas (RECIT). Volumen 3 (1): 10-22.
Revista de Ciencias Tecnológicas (RECIT). Universidad Autónoma de Baja California ISSN 2594-1925
Volumen 1 (2): 65-68 Octubre-Diciembre 2018 https://doi.org/10.37636/recit.v126568
65
ISSN: 2594-1925
Micronúcleos en reticulocitos de ratones Balb/c
tratados de forma oral con nanopartículas de plata
Micronuclei in reticulocytes of Balb / c mice orally
treated with silver nanoparticles
Castañeda-Yslas Idalia Yazmin
1
, Ruiz-Ruiz Balam
1
, Arellano-García María Evarista
1
,
Juárez-Moreno Karla Oyuki
2
, Torres-Bugarín Olivia
3
, Bogdanchikova Nina
2
, Pestryakov
Alexey
4
, Radilla-Chávez Patricia
5
1
Facultad de Ciencias, Universidad Autónoma de Baja California, KM. 106 Carr. Tijuana-Ensenada, 22800,
Ensenada, Baja California, México
2
Centro de Nanociencias y Nanotecnología, Universidad Nacional Autónoma de México, Ensenada, Baja
California, México
3
Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de Guadalajara, Guadalajara, Jalisco, México
4
Universidad Politécnica de Tomsk, 634050, Tomsk, Rusia
5
Escuela de Medicina Ensenada, Universidad Autónoma de Baja California, Ensenada, Baja California, México
Autor de correspondencia: Idalia Yazmin Castañeda Yslas, Facultad de Ciencias, Universidad Autónoma de Baja
California, KM. 106 Carr. Tij-Ens, 22800. Ensenada, Baja California, México. E-mail:
idalia.castaneda@uabc.edu.mx. ORCID: 0000-0002-6754-0736.
Recibido: 01 de Julio del 2017 Aceptado: 12 de diciembre del 2017 Publicado: 01 de Enero del 2018
Resumen. - El estudio de la genotoxicidad en modelos murinos es útil para responder las dudas relacionadas con la
seguridad por el uso de nanomateriales, sobre todo cuando se pretende el desarrollo de nuevas opciones terapéuticas. El
propósito de este trabajo fue evaluar la capacidad genotóxica de AgNPs Argovit™ a partir de la técnica de micronúcleos en
reticulocitos de sangre periférica de ratones, prueba ampliamente utilizada para conocer el potencial genotóxico de diferentes
agentes. Las nanopartículas de plata se suministraron en dosis terapéuticas por vía oral (indicadas para perros como
tratamiento para el moquillo) durante tres días a un grupo conformado por siete ratones y a otros dos grupos con igual número
de ratones se administró respectivamente agua inyectable y arabinosa C. Los especímenes fueron medidos, pesados antes y
después del experimento. También se tomaron diariamente muestras de sangre periférica mediante un corte en la punta de la
cola para posteriormente realizar extendidos sobre portaobjetos para la prueba de micronúcleos en reticulocitos. Los frotis
se fijaron en etanol al 80 % y se tiñeron con anaranjado de acridina para posteriormente leer en 1000 reticulocitos la presencia
de micronúcleos con microscopio de fluorescencia. Los resultados preliminares muestran diferencias significativas en el
número de micronúcleos en reticulocitos entre los tres grupos, por lo que se requiere comprobar este resultado con otro tipo
de modelos in vitro.
Palabras clave: Nanopartículas de Plata; Micronúcleos; Reticulocitos; Genotoxicidad.
Abstract. - The purpose of this work was to evaluate the genotoxic capacity of AgNPs Argovit™ with the micronucleus
technique in mouse peripheral blood reticulocytes. Argovitis administered orally in therapeutic doses (indicated for dogs
as treatment for distemper) for three days to an experimental group with seven mice. Another two groups with an equal number
of mice were administered with injectable water and arabinose C, respectively. The specimens were measured and weighed
before and after the experiment. Peripheral blood samples were also taken daily by a cut at the tip of the tail and then extended
on slides for micronucleus test in reticulocytes. The smears were fixed in ethanol at 80 % and stained with acridine orange,
after that, the presence of micronuclei was identified in 1000 reticulocytes counted by fluorescence microscopy. Preliminary
results show significant differences in the number of micronuclei in reticulocytes between the three groups, so it’s necessary
to compare this result with another type of in vitro models.
Keywords: Silver Nanoparticles; Micronuclei; Reticulocytes; Genotoxicity.
Revista de Ciencias Tecnológicas (RECIT). Volumen 1 (2): 65-68.
66
ISSN: 2594-1925
1. Introducción
Las nanopartículas de plata (Ag-NPs) son muy
utilizadas en aplicaciones biomédicas. El número de
investigaciones sobre la toxicidad de las Ag-NPs va en
aumento y poco se ha concluido sobre los factores que
inciden en su toxicidad a nivel celular [1, 2], pero sigue
persistiendo controversias respecto al entendimiento de
las vías del daño en líneas celulares, en lo referente a
las pruebas experimentales y el tamaño de las
nanopartículas [3]. Desde 2004, las nanopartículas de
plata Argovit™ se estudian por su actividad antiviral
en contra de rinotraqueítis infecciosa y diarrea viral
bovina [4]. Argovit™ usada para el tratamiento de
otitis humana mostró remisión de los síntomas y
reepitelización de los tejidos [5]. La administración
oral en perros de Argovit™ registró una muy alta tasa
de recuperación para tratar el moquillo [6]. En pruebas
in vivo con modelos murinos se probó la eficacia de
Argovit™ contra el virus de la fiebre del Rift [7] y en
cuanto a su efecto inmunológico, se reveló que no hay
efecto tóxico en las células inmunes y los órganos de
ratones [8]. Se ha mostrado que las nanopartículas de
plata Argovit™, presenta efectos citotóxicos en ocho
líneas de células de cáncer e induce la formación de
especies reactivas de oxígeno (ROS) [9].
El presente trabajo explora la genotoxicidad de
nanopartículas de plata Argovit™, y el antineoplásico
arabinosa C. (Ara-C) el cual evita la reparación del
ADN y causa citotoxicidad, en contraste con un control
de agua. Aquí se presentan los resultados preliminares
de estos experimentos que muestran en general una
menor genotoxicidad de las AgNPs en compraración
con Ara-C.
2. Metodología
Tres grupos de ratones balb/c se usaron para probar el
efecto genotóxico mediante la prueba de micronúcleos
en reticulocitos de sangre periférica de ratón posterior
a la administración de AgNPs de la marca Argovit™ y
el fármaco antineoplásico arabinosa-C.
2.1. Diseño experimental
21 ratones balb/c de 5-6 semanas de edad, con peso
de = 19.94 gramos, formaron aleatoriamente 3
grupos de 7 ratones cada uno. Al primer grupo se le
administró solamenente agua inyectable
intraperitonealmente, el segundo se trató con
6mg/kg de Arabinosa-C intraperitoneal y al tercero
Argovit™ 6 mg/kg con cánula de alimentación vía
oral, estos tratamientos se repitieron por tres días
consecutivos. Se prepararon frotis de sangre caudal
por duplicado cada día después del segundo día
posterior a la aplicación, y se practicó eutanasia al
séptimo día [10].
2.2. La prueba de micronúcleos
A cada uno de los organismos de cada grupo se les
tomó una muestra de sangre diariamente mediante
el corte de la punta de la cola a partir de las 48 horas
de iniciados los experimentos. Se realizaron dos
frotis con la sangre de cada animal y se analizaron
para determinar el daño acumulado con el número
de reticulocitos con micronúcleo (EPCMN) en 1000
eritrocitos policromáticos (EPC). Para observar el
efecto del tratamiento después de 24 a 48 horas post-
tratamiento, se toma en cuenta que la presencia de
EPCMN demostrarían que existe genotoxicidad
reciente (en las últimas 24 horas). Los conteos de
diferentes tratamientos se codificaron y se
analizaron estadísticamente mediante la prueba H
de Kruskal-Wallis.
3. Resultados
Las AgNPs Argovit™ produjeron menos
genotoxicidad que el anineoplásico Ara-C ya que
indujeron menos EPCMN. En los primeros tres días
después de tratar a los ratones con AgNPs, se
produjo menos daño incluso que el grupo control al
que solo se le administró agua (p < 0.05), aunque se
advierte un ligero aumento en el día 5 (Fig 1)
Revista de Ciencias Tecnológicas (RECIT). Volumen 1 (2): 65-68.
67
ISSN: 2594-1925
Figura 1. Eritrocitos policromaticos micronucleados en 1000 eritrocitos policromaticos.
El efecto de la genotoxicidad acumulada se muestra en
la figura 2 y conforme a la prueba H de Karuskal-
Wallis, las AgNPs Argovit no incrementaron
significativamente el número de micronúcleos en
10000 eritrocitos, en comparación con el grupo
control. En cambio, el antineopásico Ara-C, si
muestra efectos genotóxicos acumulativos al sexto
día de aplicación (p<0.05).
Figura 2. Eritrocitos micronucleados en 10 000 eritrocitos totales.
4. Conclusiones
La administración de Arabinosa-C produce mayor
genotoxicidad, ya que causa daños morfológicos en el
núcleo y fragmentación en el ADN, que pueden
atribuirse a la formación de especies reactivas de
oxígeno. De acuerdo con la prueba de Kruskal Wallis
los resultados indican que el fármaco Ara-C induce
Revista de Ciencias Tecnológicas (RECIT). Volumen 1 (2): 65-68.
68
ISSN: 2594-1925
mayor genotoxicidad que las AgNPs después de 24
horas de administrarlas, al igual que el efecto
acumulativo después de 5 días de aplicación. Aunque
estos resultados son preliminares se advierte, como se
esperaba, que las AgNPs Argovit™ en las
concentraciones probadas son potencialmente no
genotóxicas para este modelo de ratón. Lo que ofrece
las primeras evidencias de la seguridad toxicológica de
las AgNPs Argovit™.
Agradecimientos: a todas las instituciones involucradas, así
como a los proyectos PAPIIT-UNAM IT200114, Proyecto
CONACYT 270242, Proyecto del CONACYT de Redes No.
293417. En especial Vector-Vita Ltd., por proporcionar las
nanopartículas de plata.
Referencias
[1] B. Nowack, H. F. Krug, y M. Height, "120 years of
nanosilver history: Implications for policy makers",
Environ. Sci. Technol., vol. 45, núm. 4, pp. 1177-1183,
2011. https://doi.org/10.1021/es103316q
[2] L. Ge, Q. Li, M. Wang, J. Ouyang, X. Li, y M. M. Q.
Xing, "Nanosilver particles in medical applications:
Synthesis, performance, and toxicity", International
Journal of Nanomedicine, vol. 9, núm. 1. pp. 2399-2407,
2014. https://doi.org/10.2147/IJN.S55015
[3] Y. Li et al., "Genotoxicity of silver nanoparticles
evaluated using the Ames test and in vitro micronucleus
assay", Mutat. Res. - Genet. Toxicol. Environ. Mutagen.,
vol. 745, núm. 1-2, pp. 4-10, 2012.
https://doi.org/10.1016/j.mrgentox.2011.11.010
[4] A. G. Glotov, T. I. Glotova, A. A. Sergeev, T. V
Belkina, y A. N. Sergeev, "[Antiviral activity of different
drugs in vitro against viruses of bovine infectious
rhinotracheitis and bovine diarrhea]", Vopr Virusol, vol.
49, núm. 5, pp. 43-46, 2004.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15529864/
[5] F. V. Semenov y K. M. Fidarova, "[The treatment of
the patients presenting with chronic inflammation of the
trepanation cavity with a preparation containing silver
nanoparticles following sanitation surgery of the open
type]", Vestn. Otorinolaringol., núm. 6, pp. 117-119, 2012.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23268263/
[6] N. Bogdanchikova et al., "Silver nanoparticles
composition for treatment of distemper in dogs", Int. J.
Nanotechnol., vol. 13, núm. 1/2/3, p. 227, 2016.
https://doi.org/10.1504/IJNT.2016.074536
[7] B. Borrego et al., "Potential application of silver
nanoparticles to control the infectivity of Rift Valley fever
virus in vitro and in vivo", Nanomedicine Nanotechnology,
Biol. Med., vol. 12, núm. 5, pp. 1185-1192, 2016.
https://doi.org/10.1016/j.nano.2016.01.021
[8] O. V. Kalmantaeva et al., "Silver-nanoparticle exposure
on immune system of mice depending on the route of
administration", Nanotechnologies Russ., vol. 9, núm. 9-
10, pp. 571-576, 2014.
https://doi.org/10.1134/S1995078014050061
[9] K. Juarez-Moreno et al., "Comparison of cytotoxicity
and genotoxicity effects of silver nanoparticles on human
cervix and breast cancer cell lines.", Hum. Exp. Toxicol., p.
960327116675206, 2016.
https://doi.org/10.1177/0960327116675206
[10] Committee, Guide for the Care and Use of Laboratory
Animals: Eighth Edition. 2011.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK54050/